減少背景染色有兩種方法：（a）在銀增強之前和期間修改實驗條件;或（b）改善銀增強反應的“停止"或在完成后應用回顯影。

減少反應過程中的背景

在使用熒光素和納米金®探針FluoroNanogold的組合實驗中，發(fā)現(xiàn)在銀增強之前用0.02 M檸檬酸鈉緩沖液（pH 7.0）洗滌，其背景明顯低于許多其他處理。當使用Danscher銀增強劑進行開發(fā)時，發(fā)現(xiàn)這是有效的。當納米探針 總部銀色 使用0.02 M檸檬酸鈉緩沖液在銀增強前的pH 3.5下給予較低的背景。在免疫印跡中，我們發(fā)現(xiàn)銀增強前的0.05 M二鈉EDTA，pH 4.6也有助于最小化背景。

向Nanogold®孵育緩沖液中加入少量洗滌劑吐溫-20有助于防止疏水相互作用，這可能是非特異性結合的另一個來源。如果樣品可以耐受，用0.6 M三乙基碳酸氫銨緩沖液洗滌，其中納米金®是高度可溶的，也可以降低背景。

“停止"反應和反向開發(fā):

在大多數(shù)情況下，用去離子水或蒸餾水反復洗滌就足以停止銀增強過程。然而，它可能會在標本內繼續(xù)存在，這有時會在光學顯微鏡下導致過度顯影或深色外觀。在這種情況下，可以使用以下方法之一來“停止"銀增強反應：

• 1%醋酸。

• 1%醋酸，然后是照相定影劑（Agefix，Agfa-Gevaert或Ilfospeed 200，Ilford）。

• 直接照片修復，使用剛才提到的那些。

• 用2.5%氯化鈉短暫沖洗。

• 15-25%硫代硫酸鈉水溶液加15%亞硫酸鈉。

• 1%乙酸，在乙酸鹽緩沖液中洗滌，在0.05%氯化氫中調色₄ 3-10分鐘，用3%硫代硫酸鈉除去多余的銀。我們發(fā)現(xiàn)，在聚丙烯酰胺凝膠上運行的納米金標記蛋白質在用10%乙酸和10%葡萄糖在水中停止時保持低背景，而不僅僅是水停止。

如果反應進行得太遠，可以通過 Farmer 溶液（0.3 ml 7.5% 鐵氰hua鉀、1.2 ml 20% 硫代硫酸鈉、60 ml 水）處理來“反向顯影"以去除多余的背景染色.在金色調色之前將此溶液短暫地應用于您的樣品可能有助于去除背景銀沉積。