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我可以用什么來純化極性反應混合物?

更新時間:2023-07-25      點擊次數(shù):747

使用快速色譜法純化極性反應混合物可能是一個真正的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的正相閃蒸需要有毒的二氯甲烷 (DCM) 或氯仿與甲醇進行此類純化,這可能會產生不可預測且通常不希望的結果。這些相同的化合物通常極性太大,無法保留在反相色譜柱上并在溶劑前沿(在單柱體積或 CV 內)洗脫。如果您遇到其中一個問題,稱為 HILIC 的技術可能是解決方案。

那么,您可能會問自己什么是 HILIC? HILIC親水相互作用液相色譜。 這是一種用于分離和純化極性化合物的技術,這些化合物在反相上不保留和/或對于正相來說極性太大。

一些化學家稱這種技術為反相反相色譜,但實際上它是水性正相色譜。與正相一樣,HILIC 使用極性固定相柱(硅膠、二醇、胺等)。然而,對于 HILIC,較弱的溶劑通常是乙腈,而強溶劑是水。如您所知,甲醇通常不適用于 HILIC 分離。

直到最近,我執(zhí)行過的 HILIC 色譜法是在 20 世紀 80 年代我在另一家公司工作時開發(fā)的硅膠快速柱 QC 測試(尿嘧啶 + 胞嘧啶在醋酸銨水溶液中)和糖分離。

然而最近,我遇到了一種反應混合物,傳統(tǒng)的正相或反相都無法有效純化,所以我嘗試了HILIC。令我高興的是,這效果很好。

當我嘗試純化煙尿酸與芐胺反應的產物時,就出現(xiàn)了對 HILIC 的需求。雖然我能夠通過反相進行一些分離,但我的產品未能很好地從一些副產物中分離出來,這使得我的目標分離具有挑戰(zhàn)性,圖 1。

NA+BA RP 15-30% 丙烯酰胺

圖 1.反相快速色譜分離效果不太理想。

由于反應混合物僅溶于極性溶劑,正相提供的選擇有限。我勉強嘗試使用硅膠柱使用 DCM-MeOH (0-30%),并實現(xiàn)了良好的分離,盡管放大純化的空間很小,圖 2。

NA+BA NP 0-30% 甲醇

圖 2.正相快速色譜分離效果良好,但分辨率有限。

然后,我嘗試使用硅膠柱(5 克 Biotage® Sf?r HC)和 0-30% 乙腈水梯度進行 HILIC。這種方法提供了滿足我需求的最佳結果,解決了我的產品與副產品的問題,圖 3。

NA+BA HILIC 0-30% 水

圖 3. HILIC 快速色譜提供了產物和副產物之間的最佳分離效果和出色的分辨率。

HILIC 比傳統(tǒng)正相快速色譜法具有優(yōu)勢。正相技術使用危險、有毒的有機溶劑和一次性塑料柱,不是一種環(huán)保技術。另一方面,HILIC 確實使用乙腈,但強溶劑是水,產生危險性較小的廢物流。 HILIC 還允許硅膠柱在一定程度上重復使用(取決于粗反應混合物的純度)。在處置之前,我已將硅膠柱重復用于 HILIC 應用 4 到 5 次。



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