Poly(A) 聚合酶將 ATP（由 AMP 催化）附著到 RNA 的 3? 羥基上，這對于制備帶有 Poly(A) 尾的 RNA 非常有用。

該酶以 25 mM Tris-HCl、500 mM NaCl、1 mM MgCl ₂、0.1 mM DTT、0.1 mM EDTA 和 50% 甘油的形式提供；25°C 時 pH 8.0。

10 倍濃度的 Poly(A) 聚合酶反應緩沖液包含 500 mM Tris-HCl、2.5 M NaCl 和 100 mM MgCl ₂，25°C 時 pH 為 7.9。

Poly(A) 聚合酶催化 ATP 中的 AMP 添加到 RNA 的 3? 羥基上。該反應需要 Mg ²⁺并且與模板無關。

• 存儲溫度：–25°C 至 –15°C

• 分子量：53,870 道爾頓

?該蛋白質由表達質粒 Poly(A) 聚合酶基因的 大腸桿菌菌株產(chǎn)生。

1 個單位定義為在 37°C 下 10 分鐘內(nèi)將 1 nmol ATP 結合到酸不溶性物質中的酶量。

使用說明

1. 按所列順序配制總體積為 20 µL 的以下反應混合物：

• 15 µL 無核酸酶水中的 1-10 µg 純化 RNA

• 2 µL 10x Poly(A) 聚合酶反應緩沖液 (B7460)

• 2 µL 10mM ATP (N2070-10)

• 1 µL Poly(A) 聚合酶 (P7460L)

2. 將反應混合物在 37°C 下孵育 30 分鐘。

3. 通過添加 EDTA（終濃度 10mM）終止反應或繼續(xù)進行凈化步驟。?

質量控制

使用兩倍系列稀釋法測量比活性。_{在 1x 反應緩沖液（50 mM Tris-HCl、250 mM NaCl、10 mM MgCl 2}、pH 7.9、25°C 下）中稀釋酶，并添加到含有 15-mer RNA 寡核苷酸、1x 反應緩沖液的 50 µL 反應液中、1 mM ATP、2.5 mM MnCl ₂和 3H-ATP。反應在 37°C 下孵育 10 分鐘，置于冰上，并使用 Sambrook 和 Russell 的方法進行分析（分子克隆，v3，2001，第 A8 頁）。 25-A8.26）。

_{蛋白質濃度由 OD 280}吸光度確定。

通過濃縮和稀釋酶溶液的 SDS-PAGE，然后進行銀染檢測來評估物理純度。通過將濃縮樣品中污染物條帶的總質量與稀釋樣品中目標蛋白質對應的條帶質量進行比較來評估純度。

單鏈核酸外切酶在 50 µL 反應液中測定，其中含有放射性標記的單鏈 DNA 底物和 10 µL 酶溶液，并在 37°C 下孵育 4 小時。

雙鏈核酸外切酶活性在 50 µL 反應液中測定，其中含有放射性標記的雙鏈 DNA 底物和 10 µL 酶溶液，并在 37°C 下孵育 4 小時。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性在含有 0.5 µg 質粒 DNA 和 10 µL 酶溶液的 50 µL 反應液中測定，并在 37°C 下孵育 4 小時。

使用 5 µL 酶溶液重復樣品評估大腸桿菌污染，這些樣品已變性，并使用與 16S rRNA 基因座相對應的寡核苷酸引物 ?在 TaqMan qPCR 測定中篩選污染大腸桿菌基因組 DNA 的存在?。?

使用 RNAse Alert 試劑盒（Integrated DNA Technologies）按照制造商的指南評估非特異性 RNAse 污染。

該產(chǎn)品可用于分子生物學應用，例如：

• 制備多聚A尾RNA

• 3'端RNA標記

• mRNA療法