2.

一抗將一抗在適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。
孵育
在合適的緩沖液清洗兩次，每次5分鐘

3.

將兩份PLA®探針，以1：5的比例在適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。
+37 °C孵育60分鐘用1 x洗滌液A清洗2次，每次5分鐘

4.

在H2O中以1：5的比例稀釋連接儲(chǔ)液。

在該溶液中以1:40比例稀釋連接酶并將混合物添加至樣品中。

+37 °C孵育30分鐘用1 x洗滌液A清洗2次，每次2分鐘

5.

在H2O中以1：5的比例稀釋擴(kuò)增儲(chǔ)液。在該溶液中以1:80比例稀釋聚合酶并將混合物添加至樣品中。
+37 °C孵育100分鐘用1 x洗滌液B清洗2次，每次10分鐘用0.01x洗滌液B清洗1分鐘

6.

成像準(zhǔn)備使用含有DAPI的Duolink原位封固劑加載樣品，等待15分鐘，然后在熒光或共聚焦顯微鏡下進(jìn)行分析。

注意：

• 使用沒(méi)有蓋玻片的開放液滴反應(yīng)，并在加濕室中進(jìn)行所有孵育。

• 請(qǐng)使用冷凍塊將酶從冷凍室（-20oC）中取出。

• 應(yīng)在搖床上以最小體積（70毫升），并輕微搖晃進(jìn)行清洗。