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ozbiosciences脂轉(zhuǎn)染技術(shù)是如何工作的?

更新時(shí)間:2024-01-05      點(diǎn)擊次數(shù):701

脂轉(zhuǎn)染是一種基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染該技術(shù)屬于生化方法,還包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸鈣。

脂轉(zhuǎn)染原理是將核酸與陽離子脂質(zhì)制劑結(jié)合起來。由此產(chǎn)生的分子復(fù)合物(稱為脂質(zhì)復(fù)合物)隨后被細(xì)胞吸收。 

脂轉(zhuǎn)染的主要優(yōu)點(diǎn)是效率高、能夠在多種細(xì)胞類型中轉(zhuǎn)染所有類型的核酸、易于使用、重現(xiàn)性好和低毒性。此外,該方法適用于所有轉(zhuǎn)染應(yīng)用(瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、共轉(zhuǎn)染、反向轉(zhuǎn)染、順序轉(zhuǎn)染或多重轉(zhuǎn)染……)、高通量篩選測定,并且在一些體內(nèi)模型中也顯示出良好的效率。

它是如何工作的?

用于脂轉(zhuǎn)染的脂質(zhì)試劑通常由合成的陽離子脂質(zhì)組成,這些脂質(zhì)通常與輔助脂質(zhì)(例如 DOPE(1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺)或膽固醇)混合。這些脂質(zhì)混合物在生理 pH 值下組裝在脂質(zhì)體或膠束中,總體帶正電荷,并能夠通過靜電相互作用與帶負(fù)電荷的核酸形成復(fù)合物(脂質(zhì)復(fù)合物)?;谥|(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑與核酸的結(jié)合導(dǎo)致核酸的緊密壓縮和保護(hù),并且這些陽離子復(fù)合物主要通過內(nèi)吞作用內(nèi)化。

一旦進(jìn)入細(xì)胞,就會有兩種導(dǎo)致核酸釋放到細(xì)胞質(zhì)中的機(jī)制。一種依賴于聚陽離子殘基的內(nèi)體緩沖能力(稱為“質(zhì)子海綿效應(yīng)")。另一種描述了細(xì)胞帶負(fù)電荷的脂質(zhì)中和轉(zhuǎn)染試劑的陽離子殘基導(dǎo)致內(nèi)體膜不穩(wěn)定的能力。

最后,導(dǎo)致 DNA 核攝?。╯iRNA 不需要)以及隨后基因表達(dá)的細(xì)胞和分子事件仍然具有高度推測性。然而,細(xì)胞分裂對轉(zhuǎn)染效率的重要性支持這樣的假設(shè):有絲分裂過程中核膜破壞促進(jìn) DNA 核攝取。盡管如此,原代細(xì)胞(非分裂)和體內(nèi)的轉(zhuǎn)染也可以通過脂轉(zhuǎn)染來實(shí)現(xiàn),這證明DNA可以進(jìn)入發(fā)生基因表達(dá)的細(xì)胞核。


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