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使用 dsGreen 染料進(jìn)行 qPCR

更新時間:2024-03-18      點(diǎn)擊次數(shù):683

dsGreen 是一種非常靈敏的染料,用于檢測雙鏈 DNA (dsDNA)。兩種染料均用于實(shí)時 qPCR 實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)增的非特異性檢測。

  1. 如果 dsGreen 試劑儲存溫度低于 20 °С,請將其解凍并保存在室溫下。為了快速解凍,可將試劑加熱至 50 °С。

  2. 根據(jù) PCR 試劑制造商的說明計(jì)算反應(yīng)所需試劑的體積。請注意,dsGreen(庫存 100х)必須在 PCR 主混合物中稀釋至最高 1 倍濃度。

  3. 根據(jù) PCR 試劑制造商的說明制備不含 DNA 的 1x 主混合物,添加必要量的 dsGreen。如果您使用不帶熱啟動的 Taq 聚合酶,請將預(yù)混液和 PCR 管放在冰上。

  4. 將主混合物轉(zhuǎn)移至管或板中并添加 DNA。

  5. 根據(jù)您的儀器制造商的說明繼續(xù)進(jìn)行放大。

筆記:

qPCR 實(shí)驗(yàn)中始終包含陽性和陰性對照。 qPCR 擴(kuò)增的溫度程序與給定模板和引物的標(biāo)準(zhǔn) PCR 程序沒有區(qū)別。對于檢測,應(yīng)使用 FAM 通道。為了能夠區(qū)分特定產(chǎn)物和引物二聚體,請?jiān)?PCR 程序中使用熔解曲線步驟。



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